人14-3-3蛋白酶聯(lián)免疫試劑盒

人14-3-3蛋白酶聯(lián)免疫試劑盒

人14-3-3蛋白酶聯(lián)免疫試劑盒?
【工作原理】
14-3-3是一個豐富的廣泛表達(dá)的蛋白家族，是一個可以自發(fā)聚集成二聚體的多功能蛋白質(zhì)。初在腦脊液提取物中檢測出14-3-3蛋白的相對高豐度。14-3-3廣泛分布于從植物到哺乳動物等所有真核生物中，哺乳動物有7種異構(gòu)體，大部分以同源或異源二聚體形式存在于細(xì)胞質(zhì)中，與多種細(xì)胞蛋白結(jié)合并相互作用。14-3-3以穩(wěn)定的同源/異源二聚體形式聚集在一起，能同時結(jié)合兩個配體。所有14-3-3的三級結(jié)構(gòu)都極其相似，哺乳動物14-3-3蛋白是由兩個單體連接形成的杯狀二聚體結(jié)構(gòu)，每個單體由9個α螺旋（αA～αI）組成，反向平行排列成L型結(jié)構(gòu)，彼此間被一短環(huán)間隔，其中αC和αD的氨基酸序列長（30～34個氨基酸殘基），它們跨越整個單體并連接形成一個卷曲的螺旋結(jié)構(gòu)。二聚體界面由一個單體的αA與另一個單體的αC和αD構(gòu)成，其中含有疏水性殘基和極性殘基，形成高度保守的兼性溝槽。所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒（ELISA）。預(yù)先包被的人14-3-3蛋白人14-3-3蛋白抗體為單克隆人14-3-3蛋白人14-3-3蛋白抗體，檢測相人14-3-3蛋白人14-3-3蛋白抗體為多克隆人14-3-3蛋白人14-3-3蛋白抗體，經(jīng)生物素（biotin）標(biāo)記。樣品和生物素標(biāo)記人14-3-3蛋白人14-3-3蛋白抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后，PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng)；經(jīng)過PBS或TBS的徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關(guān)。人14-3-3蛋白酶聯(lián)免疫試劑盒?
【每套試劑盒中內(nèi)容】(96T)
材料 數(shù)量
人14-3-3蛋白標(biāo)準(zhǔn)品 96T(2vial）
預(yù)包被人14-3-3蛋白人14-3-3蛋白抗體的96孔板 96T( 8×12)
生物素標(biāo)記人14-3-3蛋白人14-3-3蛋白抗體 96T(1:100)
ABC（過氧化物酶標(biāo)記親和素） 96T(1:100)
樣品稀釋液 96T
人14-3-3蛋白人14-3-3蛋白抗體稀釋液 96T
ABC稀釋液 96T
TMB顯色液A 96T
TMB顯色液B 96T
TMB終止液 96T
ELISA專用洗滌液 96T(1:25)【需要而未提供的試劑和器材】
1． 37℃恒溫箱。
2． 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。
3． 自動洗板機(jī)。
4． 單通道或多通道可調(diào)節(jié)移液器以及其吸頭。
5． 蒸餾水，容量瓶等
6． 干凈的試管和Eppendof管。人14-3-3蛋白酶聯(lián)免疫試劑盒?
【注意事項】
1． 開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。
2． 配制各種試劑時，切記混勻！
3． 用戶在初次使用試劑盒時，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。
4． 建議所有人14-3-3蛋白標(biāo)準(zhǔn)品、樣本都做雙份檢測。
5． 要嚴(yán)格避免操作過程中酶標(biāo)板干燥。干燥會使酶標(biāo)板上生物成份迅速失活！
6． 為免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和試管。【洗板方法】
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將推薦的PBS或TBS洗滌緩沖液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。
自動洗板：如果有自動洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗過程中?！緲悠返臏?zhǔn)備和保存】
樣品如果不立即分析，應(yīng)分裝后冷凍保存，且避免反復(fù)凍融。
血清——用干凈試管收集血液，室溫凝固2小時或4℃過夜，離心1000×g 10分鐘，收集血清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
細(xì)胞培養(yǎng)、組織勻漿、腦脊液、體液——離心去除沉淀，立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。【樣品稀釋的一般原則】
用戶須查閱文獻(xiàn)了解標(biāo)本內(nèi)待測因子的含量，決定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)，以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA試劑盒的佳檢測范圍。樣品的稀釋應(yīng)有詳細(xì)記錄?！驹噭┑臏?zhǔn)備和保存】
A. 人14-3-3蛋白標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋和使用：在使用前2小時內(nèi)準(zhǔn)備。將凍干品管內(nèi)加入500ul樣品稀釋液，徹底溶解后取出250ul加入到750ul樣品稀釋液中，混勻后做倍比稀釋。
稀釋后的人14-3-3蛋白標(biāo)準(zhǔn)品在2小時內(nèi)使用。B．生物素標(biāo)記人14-3-3蛋白人14-3-3蛋白抗體工作液：在使用前2小時